1.目前基因治疗所采用的基本方法有基因矫正、基因置换(对患者缺陷基因进行重组)、基因增补和基因失活等,其中基因增补是目前临床上主要采用的方法。基因增补不删除突变的致病基因,而在靶细胞基因组的某一位点额外插入正常基因(目的基因),使体内表达出功能正常的蛋白质,从而达到治疗疾病的目的。基因增补的具体实施方案为:先将需要接受目的基因的细胞从体内取出,在体外培养,然后将携带有目的基因的载体导入细胞内,最后筛选出表达目的基因的细胞,经过繁殖扩大后输入患者体内。
2.PCR(聚合酶链反应)是一种在体外大量扩增目的基因片段的分子生物学技术。PCR的主要用途包括:
①目的基因的克隆,应用PCR技术可将人们感兴趣的DNA片段进行大量扩增、克隆;
②基因的体外突变,利用PCR技术可以随意设计引物在体外对目的基因片段进行嵌合、缺失、点突变等改造;
③DNA和RNA的微量分析,PCR技术高度敏感,对模板DNA的量的要求很低,是DNA和RNA微量分析(RNA微量分析利用RT-PCR技术,属于基因表达检测范畴)最好的方法;
④DNA的序列测定,将PCR技术引入DNA序列测定,使得测定工序大为简单,也提高了测序的速度;
⑤基因的突变分析,PCR与其他技术结合可以大大提高基因突变检测的敏感性,例如单链构象多态性分析、等位基因特异的寡核苷酸探针分析等。
3.癌基因可编码生长因子、生长因子受体、信号转导蛋白、细胞周期蛋白、转录因子等产物。
4.原癌基因(细胞癌基因)在进化过程中高度保守,从单细胞酵母、无脊椎生物到脊椎动物乃至人类的正常细胞都存在着这些基因。原癌基因的表达产物对细胞正常生长、繁殖、发育和分化起着精确的调控作用。Rb是最早被发现的抑癌基因。
5.质粒是细菌染色体外的,能自主复制和稳定遗传的双链环状DNA分子,是DNA重组技术中最常用的克隆载体,其目的是携带外源DNA(目的基因)进入受体细胞中复制扩增。